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平板克隆形成實驗

簡要描述：平板克隆形成實驗：平板克隆試驗可以檢測貼壁細胞的克隆形成能力，克隆形成試驗可反映細胞群體依賴性和增殖能力。

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詳細介紹

平板克隆形成實驗可以檢測貼壁細胞的克隆形成能力，克隆形成試驗可反映細胞群體依賴性和增殖能力。一般細胞在體外增殖六代以上，其后代形成的細胞群體稱為細胞集落或克隆。每個克隆由單一細胞而來，含有50個以上細胞大小在0.3-1mm之間。通過克隆形成可檢測各種理化因素對細胞克隆形成能力的影響。

平板克隆形成實驗基本步驟:

1.取對數(shù)生長期的各組細胞，分別用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個細胞并把細胞縣浮在10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中衡用。

2.將細胞縣液作梯度倍數(shù)稀釋，每組細胞分別以每皿50、100、200個細胞的梯度密度分別接種合10mL 37"C預(yù)溫培養(yǎng)液的皿中，并輕輕轉(zhuǎn)動，使細胞分散均勻。置37C、5% CO2及飽和溫度的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3周。

3.經(jīng)常觀察，當培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時，終止培養(yǎng)。棄去上清液，用PBS小心浸洗2次。加甲醛固定細胞5ml固定15分鐘。然后安固定液加適量GIMSA應(yīng)用染色液染10-30分鐘然后用流水緩慢洗去染色源，空氣干燥。

4.將平皿倒置并疊加一張帶網(wǎng)格的適明膠片，用肉眼直接計數(shù)克隆或在顯微鏡(低倍鏡)計數(shù)大于10個細胞的克隆數(shù)，再計算克隆形成率，克隆形成率=克隆數(shù)/接種細胞數(shù)。

服務(wù)流程:

1)項目方案的確定，包括目的細胞、細胞處理方式及處理時間等；

2)細胞培養(yǎng)；

3)克隆形成實驗；

4)克隆形成實驗圖片及實驗報告。

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