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雙熒光素技術(shù)

更新時間:2022-05-23      點擊次數(shù):1021

熒光素酶報告基因系統(tǒng)是以熒光素(luciferin)為底物來檢測熒光素酶活性的一種報告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的過程中,會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。然后可以通過熒光測定儀(化學發(fā)光儀)測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發(fā)光體系,可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。

雙熒光素酶體系,即有兩種熒光素酶,比較常見的組合是螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶,螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素,而海腎熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素。以其中一個作為內(nèi)參對照,即表達量基本恒定,用于減少試驗中不同處理間所固有的變化,包括培養(yǎng)細胞的數(shù)目及活力的差異,細胞轉(zhuǎn)染及裂解的效率,而另外一個熒光素酶則作為報告基因,用于指示不同處理條件下基因的表達情況。

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